方法原理

氨氮

氯化鉀溶液提取土壤中的氨氮，在堿性條件下，提取液中的氨離子在有次氯酸根離子存在時(shí)與苯酚反應(yīng)生成藍(lán)色靛酚染料，在 630 nm 波長(zhǎng)具有最大吸收。在一定濃度范圍內(nèi)，氨氨濃度與吸光度值符合朗伯-比爾定律。

亞硝酸鹽氮

氯化鉀溶液提取土壤中的亞硝酸鹽氮,在酸性條件下,提取液中的亞硝酸鹽氮與磺胺反應(yīng)生成重氮鹽，再與鹽酸N-(1-萘基)-乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料，在波長(zhǎng) 543nm 波長(zhǎng)具有最大吸收。在一定濃度范圍內(nèi)，亞硝酸鹽氨濃度與吸光度值符合朗伯-比爾定律。

硝酸鹽氮

氯化鉀溶液提取土壤中的硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氮,提取液通過還原柱,將硝酸鹽氮還原為亞硝酸鹽氮，在酸性條件下，亞硝酸鹽氨與磺胺反應(yīng)生成重氮鹽，再與鹽酸N-(1-萘基)-乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料，在波長(zhǎng) 543 nm 處具有最大吸收，測(cè)定硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氨總量。硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氮總量與亞硝酸鹽氨含量之差即為硝酸鹽氮含量。

試劑

氨氮

濃硫酸

二水檸檬酸鈉

氫氧化鈉

二氯異氰尿酸鈉

氯化鉀

氯化銨

氯化鉀溶液:c(KCI)=1 mol/L

氯化銨標(biāo)準(zhǔn)貯備液:ρ(NHCI)=200 mg/L

氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液:p(NHCI)=10.0 mg/L

苯酚溶液：稱取 70 g苯酚(CHOH)溶于 1000 m 水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存一年。

二水硝普酸鈉溶液：稱取 0.8g二水硝普酸鈉{Na₂[Fe(CN)₅NO]·2H₂O}溶于 1000 ml 水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存三個(gè)月。

緩沖溶液：稱取 280g二水檸檬酸鈉及 22.0g氫氧化鈉，溶于 500 ml水中，移入1000 ml 容量瓶中，用水定容，混勻。

硝普酸鈉-苯酚顯色劑：量取 15 ml 二水硝普酸鈉溶液及 15 ml苯酚溶液和 750 ml水，混勻。該溶液用時(shí)現(xiàn)配。

二氯異氰尿酸鈉顯色劑：稱取 5.0 g二氯異氰尿酸鈉溶于 1000 ml 緩沖溶液中，4℃下可保存一個(gè)月。

亞硝酸鹽氮

濃磷酸

氯化鉀

亞硝酸鈉

氯化鉀溶液:c(KCI)=1 mol/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液:p(NO₂-N)=1000 mg/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液I:p(NO₂-N)=100 mg/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液Ⅱ:p(NO₂-N)=10.0 mg/L

磺胺溶液

鹽酸N-(1-萘基)-乙二胺溶液

顯色劑

硝酸鹽氮

濃磷酸

濃鹽酸

鎘粉

氯化鉀

硝酸鈉

亞硝酸鈉

氯化銨

硫酸銅

氨水

氯化鉀溶液

硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ(NO₃-N)=1000 mg/L

硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液I：p(NO₃-N)=100 mg/L

硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液Ⅱ：p(NO₃-N)=10.0 mg/L

硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液Ш：p(NO₃-N)=6.0 mg/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液：p(NO₂-N)=1000 mg/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)中間液：p(NO₂-N)=100 mg/L

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液Ш：p(NO₂-N)=6.0 mg/L

氨水溶液

氯化銨緩沖溶液貯備液：p(NH₄CI)=100 g/L

氯化銨緩沖溶液使用液：p(NH₄CI)=10 g/L

磺胺溶液

鹽酸 N-(1-萘基)-乙二胺溶液

顯色劑

儀器和設(shè)備

分光光度計(jì):具 10 mm 比色皿。

pH 計(jì):配有玻璃電極和參比電極。

恒溫水浴震蕩器:振蕩頻率可達(dá) 40 次/分鐘。

還原柱:用于將硝酸鹽氮還原為亞硝酸鹽氮，具體制備方法見附錄C。

離心機(jī):轉(zhuǎn)速可達(dá) 3000 r/min，具 100 ml聚乙烯離心管。

天平:精度為 0.001g。

聚乙烯瓶:500ml,具螺旋蓋?；虿捎眉炔晃找膊幌蛉芤褐嗅尫潘鶞y(cè)組分的其他容器。

具塞比色管:20 ml、50 ml、100 ml。

樣品篩:5 mm。

一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。

試料的制備

稱取 40.0g試樣(6.3)，放入 500 ml 聚乙烯瓶中，加入 200 ml氯化鉀溶液(4.1.7)，在20+2℃的恒溫水浴震蕩器中震蕩提取1h。轉(zhuǎn)移約 60 ml 提取液于 100ml 聚乙烯離心管中，在 3000 r/min 的條件下離心分離 10 min。然后將約 50 ml 上清液轉(zhuǎn)移至 100 ml 比色管中

制得試料，待測(cè)。

^{注 2:提取液也可以在4℃下，以靜置 4h的方式代替離心分離，制得試料。}

分析步驟

氨氮

校準(zhǔn)

分別量取 0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、3.50 ml氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液于一組100 ml 具塞比色管中，加水至 10.0 ml，制備標(biāo)準(zhǔn)系列。氨氨含量分別為 0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、35.0 μg.

向標(biāo)準(zhǔn)系列中加入 40 ml 硝普酸鈉-苯酚顯色劑，充分混合，靜置 15 min。然后分別加入 1.00 ml 二氯異氰尿酸鈉顯色劑，充分混合，在 15℃~35℃條件下至少靜置 5h。于 630 nm 波長(zhǎng)處，以水為參比，測(cè)量吸光度。以扣除零濃度的校正吸光度為縱坐標(biāo)，氨氮含量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

測(cè)定

量取 10.0 ml 試料至 100 ml具塞比色管中，按照校準(zhǔn)曲線比色步驟測(cè)量吸光度。

^{注 4:當(dāng)試料中氨氮濃度超過校準(zhǔn)曲線的最高點(diǎn)時(shí)，應(yīng)用氣化鉀溶液稀釋試料，重新測(cè)定。}

空自試驗(yàn)

量取 10.0 ml 空白試料至 100 ml具塞比色管中，按照校準(zhǔn)曲線比色步驟測(cè)量吸光度。

亞硝酸鹽氮

校準(zhǔn)

分別量取 0、1.00、5.00 ml 亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液和 1.00、3.00、6.00 ml亞硝酸鹽氨標(biāo)準(zhǔn)使用液I于一組 100ml容量瓶，加水稀釋至標(biāo)線，混勻，制備標(biāo)準(zhǔn)系列，亞硝酸鹽氨含量分別為0、10.0、50.0、100、300、600 μg。

分別量取 1.00 ml 上述標(biāo)準(zhǔn)系列于一組 25ml 具塞比色管中，加入 20 ml水，搖勻。向每個(gè)比色管中加入 0.20 ml 顯色劑,充分混合,靜置 60 min 至 90 min，在室溫下顯色于 543nm 波長(zhǎng)處，以水為參比，測(cè)量吸光度。以扣除零濃度的校正吸光度為縱坐標(biāo)，亞硝酸鹽氨含量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

測(cè)定

量取 1.00ml 試料至 25 m 比色管中，按照校準(zhǔn)曲線比色步驟測(cè)量吸光度。

^{注 5:當(dāng)試料中的亞硝酸鹽氮含量超過校準(zhǔn)曲線的最高點(diǎn)時(shí)，應(yīng)用氣化鉀溶液稀釋試料，重新測(cè)定。}

空自試驗(yàn)

量取 1.00ml 空白試料至 25 ml 比色管中，按照校準(zhǔn)曲線比色步驟測(cè)量吸光度。

硝酸鹽氮

還原柱使用前的準(zhǔn)備

打開活塞，讓氯化銨緩沖溶液全部流出還原柱。必要時(shí)，用水清洗掉表面所形成的鹽再分別用 20ml 氯化銨緩沖溶液使用液、20ml氯化銨緩沖溶液貯備液和20ml氯化銨緩沖溶液使用液濾過還原柱，待用。

校準(zhǔn)

分別量取 0、1.00、5.00 ml 硝酸鹽氨標(biāo)準(zhǔn)使用液Ⅱ和 1.00、3.00、6.00 ml 硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液I于一組 100ml 容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，混勻，制備標(biāo)準(zhǔn)系列，硝酸鹽氨含量分別為 0、10.0、50.0、100、300、600μg。

關(guān)閉活塞，分別量取 1.00 ml 校準(zhǔn)系列于還原柱中。向還原柱中加入 10ml 氯化銨緩沖溶液使用液，然后打開活塞，以 1mlmin 的流速通過還原柱，用 50ml 具塞比色管收集洗脫液。當(dāng)液面達(dá)到頂部棉花時(shí)再加入 20ml 氯化銨緩沖溶液使用液，收集所有流出液，移開比色管。最后用 10ml氯化銨緩沖溶液使用液清洗還原柱。

向上述比色管中加入 0.20ml 顯色劑(4.3.23),充分混合,在室溫下靜置 60min 至 90min。于 543nm 波長(zhǎng)處，以水為參比，測(cè)量吸光度。以扣除零濃度的校正吸光度為縱坐標(biāo)，硝酸鹽氮含量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

測(cè)定

量取 1.00m 試料至還原柱中，按照校準(zhǔn)曲線步驟測(cè)量吸光度。

^{注:當(dāng)試料中硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氮的總量超過校準(zhǔn)曲線的最高點(diǎn)時(shí)，應(yīng)用氯化鉀溶液稀釋試料，重新測(cè)定。}

空自試驗(yàn)

量取 1.00ml 空白試料至還原柱中，按照校準(zhǔn)曲線步驟測(cè)量吸光度。

結(jié)果計(jì)算與表示

結(jié)果表示

當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于 1mgkg 時(shí)，保留兩位小數(shù);當(dāng)測(cè)定結(jié)果大于等于 1mgkg 時(shí)，保留三位有效數(shù)字。