藥物雜質(zhì)分析方法之紫外可見分光光度法

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在藥物研發(fā)中，藥物中會(huì)存在無治療作用或者影響藥物療效和穩(wěn)定性的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)甚至?xí)?duì)人體健康造成危害。因此進(jìn)行藥物雜質(zhì)分析并控制藥物中的雜質(zhì)含量，為確保用藥安全有效提供保障。分光光度法是一種對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法，紫外可見分光光度法是其方法之一，可用于藥物雜質(zhì)分析、藥物鑒別和含量測(cè)定等方面。


藥物來源具有多樣性和復(fù)雜性，加上藥物結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的特點(diǎn)，在藥物生產(chǎn)、儲(chǔ)藏和使用過程中，不可避免地會(huì)引入雜質(zhì)。當(dāng)藥物中含有的雜質(zhì)超過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的純度要求時(shí)，可能使藥物的外觀性狀、理化常數(shù)發(fā)生改變，含量明顯偏低或者藥物活性降低等，不僅會(huì)影響藥物的質(zhì)量，還能反映出生產(chǎn)工藝中存在的問題。藥物雜質(zhì)分析對(duì)于藥物質(zhì)量的檢驗(yàn)與控制起到重要作用。美迪西提供藥物雜質(zhì)分析服務(wù)，可以利用HPLC等各種技術(shù)分離監(jiān)管起始原料、中間體、API和藥物產(chǎn)品中的雜質(zhì)。


分光光度法是通過測(cè)定待測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法，紫外可見分光光度法可在190~800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的吸光度。當(dāng)光穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不同而變化。因此紫外分光光度法通過測(cè)定物質(zhì)在不同波長(zhǎng)出的吸光度，并繪制其吸光度與波長(zhǎng)的關(guān)系圖即得被測(cè)物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長(zhǎng)和最小吸收波長(zhǎng)，物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。用于定量時(shí)，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對(duì)照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。


紫外分光光度計(jì)已有是一種比較成熟常用的分析方法，應(yīng)用廣泛，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用主要集中在快速監(jiān)測(cè)水樣中金屬離子和有機(jī)污染物，抗生素、維生素等藥物檢測(cè)，對(duì)飲料或發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制，測(cè)算氨基酸含量，乳制品蛋白質(zhì)含量監(jiān)測(cè)，分析農(nóng)藥及其殘留物中有害物質(zhì)，控制石油產(chǎn)品質(zhì)量和測(cè)定飼料中添加劑等物質(zhì)含量等方面。


我國(guó)有研究者利用紫外分光光度法(紫外分光光度法)測(cè)定氨甲苯酸葡萄糖注射液中氨甲苯酸的含量。方法是確定測(cè)定波長(zhǎng)，進(jìn)行線性分析，考察干擾性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)氨甲苯酸濃度在4.8～11.2μg/mL范圍內(nèi)與吸收度A呈良好線性關(guān)系，用紫外分光光度法測(cè)定無干擾。因此氨甲苯酸葡萄糖注射液定量稀釋后可用紫外分光光度法測(cè)定其氨甲苯酸的含量。


葡萄糖注射液或葡萄糖口服制劑中的葡萄糖在高溫或弱酸等條件下脫水會(huì)產(chǎn)生5-HMF，過量的5-HMF對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟是有損害的。5-HMF含量的控制是很重要的質(zhì)量指標(biāo)。5-HMF的最大吸收波長(zhǎng)為284nm，該處干擾較少，紫外分光光度法?？梢宰鳛?-HMF檢查的首選方法。如中國(guó)藥典2000、BP2000、USP27和日本藥局方中納入的葡萄糖注射液，均采用紫外分光光度法控制5-羥甲基糠醛含量。如果制劑中的主藥或輔料在284nm有明顯的吸收，會(huì)干擾5-HMF的檢查，可采用HPLC法代替。


紫外分光光度法用于喜樹堿含量的測(cè)定[1]。由于喜樹堿內(nèi)酯環(huán)開環(huán)后在254nm波長(zhǎng)下紫外吸收增強(qiáng)，而開環(huán)的喜樹堿毒副作用大。鑒于目前喜樹堿含量測(cè)定均采用254nm，且喜樹堿在大多數(shù)溶劑中溶解性較差，為更準(zhǔn)確便捷地檢測(cè)喜樹堿原料藥的含量，有必要探索在新的波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹堿含量的方法。


研究者將喜樹堿在200~400nm掃描，發(fā)現(xiàn)在367nm處有較大吸收，且溶劑二甲基亞砜無干擾。因此采用367nm波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹堿含量，并進(jìn)行含量測(cè)定方法學(xué)考察。喜樹堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0423x+0.0132，r=0.9996，濃度在4~20μg/mL與其吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。平均加樣回收率為101.76%，RSD為0.75%，結(jié)果重現(xiàn)性良好，符合方法學(xué)要求。在367nm波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹堿含量，所受干擾較小，測(cè)定結(jié)果可信度高。


藥物的價(jià)值在于為人們的生命和健康提供保障，幫助病人預(yù)防或擺脫疾病的困擾，為了最大可能地發(fā)揮藥物的價(jià)值，就必須要進(jìn)行藥物雜質(zhì)分析，去掉有害雜質(zhì)，盡最大可能地消除危害人體健康的不利因素。紫外可見分光光度在是一項(xiàng)專屬性較強(qiáng)的分析方法，可以直接用于藥物成分、含量的專一和有效的測(cè)定，在藥物雜質(zhì)分析和藥物含量分析中具有重大作用。